RSS подписка
Реклама
 

Почва является благоприятной средой для развития микроорганизмов, она обильно населена ими и является основным источником распространения микробов. В почве есть всё необходимое для жизнедеятельности микроорганизмов – органические и минеральные вещества, влага, здесь они защищены от губительных ультрафиолетовых лучей солнца. Количество микробов в почве и их видовой состав зависят от различных почвенно-климатических факторов – механического состава почвы, её влагоёмкости, кислотности вида, обработки, времени года и др.

В почве много палочковидных бактерий, актиномицетов, плесневых грибов.

Посев микроорганизмов из почвы. Для определения количества микроорганизмов в 1 г почвы применяют метод питательных агаровых пластинок – поверхностный посев на МПА в чашках Петри, используя предварительное разведение. Из средней пробы исследуемой почвы в день анализа берут навеску 1 г и переносят её в колбу со 100 мл стерильной воды. Колбу взбалтывают 10 мин и дают 1 мин отстояться, получают разведение 1:100 (в 1 мл воды находится 0,01 г почвы). Готовят 4 пробирки с 9 мл воды в каждой и заранее стерилизуют их в автоклаве. Из колбы пипеткой набирают 1 мл почвенной суспензии и переносят в пробирку № 1, раствор при этом разбавляется в десять раз (разведение 1:1000). Другой пипеткой продувают полученную смесь для равномерного перемешивания, затем набирают 1 мл и переносят в пробирку № 2, получая при этом десятикратное разведение предыдущего раствора (1:10 000). Новой пипеткой сначала продувают полученный почвенный раствор, а потом набирают 1 мл и переносят в пробирку № 3 (разведение 1: 100 000). Затем, поступая аналогично, переносят   1 мл    из      пробирки  № 3 в   пробирку № 4  (разведение

1:1 000 000), а из неё набирают градуированной пипеткой и переносят на поверхность МПА в чашке Петри 0,1 мл (разведение 1:10 000 000). Стерильным стеклянным шпателем почвенную суспензию растирают лёгкими круговыми движениями досуха по поверхности среды, не повреждая её при этом. 

Автор: Admin | Добавлено: 28-12-2011, 20:39 | Комментариев (0)

Воздух – неблагоприятная среда для микроорганизмов. Он не является средой постоянного обитания, а только временного нахождения или переноса микроорганизмов. В воздухе нет питательных веществ, постоянной оптимальной температуры, часто отсутствует влага, губительно действуют на микробы солнечные лучи. Микроорганизмы попадают в воздух главным образом с пылью или каплями жидкости с поверхности почвы, растений, животных, транспорта, водной поверхности. Микробы в воздухе распространены неравномерно. Количественный и качественный состав микрофлоры воздуха находится в прямой зависимости от микрофлоры почвы, над которой берут пробу воздуха. Количество микроорганизмов зависит от погоды (в дождливую их меньше, чем в сухую), от времени года (летом их больше, чем зимой) и места взятия пробы (над крупными населенными пунктами микробов больше, чем над сельской местностью). Микроорганизмов мало в воздухе над лесами, садами, лугами, озёрами, океаном, высоко в горах и на севере.

Микрофлора воздуха характеризуется наличием большого количества шаровидных бактерий (микрококков, диплококков, сарцин, стафилококков), устойчивых к недостатку влаги и ультрафиолетовым лучам и образующих разноцветные пигментированные колонии на питательной среде, встречаются также палочковидные формы и плесневые грибы.

За сутки через легкие человека проходит 12-14 тыс. литров воздуха. Воздушным путем распространяются возбудители гриппа, туберкулёза, оспы, пневмонии, коклюша, ангины, катара верхних дыхательных путей и др.

Посев микроорганизмов из воздуха. Наиболее простым способом определения общего количества микроорганизмов в воздухе является метод оседания микробов на агаровую пластинку, предложенный Р. Кохом. Метод заключается в том, что чашку Петри с мясопептонным   агаром    открывают  в  исследуемом  помещении на 5 мин, после чего закрывают крышкой, оборачивают бумагой, переворачивают вверх дном во избежание размыва колоний конденсационной водой, подписывают и помещают в термостат при 28-30 ºС для выращивания микробов, которые оседают на питательную среду вместе с пылью. По количеству выросших колоний можно судить о степени загрязненности воздуха микроорганизмами.

Автор: Admin | Добавлено: 28-12-2011, 20:38 | Комментариев (0)

Холодные способы стерилизации включают различные приемы уничтожения микроорганизмов. Называют их холодными условно, чтобы подчеркнуть, что они не основываются на действии высоких температур. При этом нужно помнить, что низкие отрицательные температуры не убивают, а только задерживают рост и развитие микроорганизмов.

К холодной стерилизации относятся:

1. Химическая стерилизация, или дезинфекция – это уничтожение патогенных (болезнетворных) микроорганизмов с помощью химически ядовитых веществ (антисептиков). Метод используют в медицине. К антисептикам, или дезинфицирующим средствам относятся мыла, красители (зелёнка), соли тяжёлых металлов, окислители (хлор, йод, перекись водорода, перманганат калия), формалин , формальдегиды, спирты и др.

2. Физические методы стерилизации: стерилизация ультрафиолетовыми лучами (УФ) – используют при кварцевании, ультразвуком (УЗ), током ультравысокой частоты (УВЧ) и др. Эти приемы широко используют в медицине.

3. Стерилизация фильтрованием. Механическое освобождение от микроорганизмов путем фильтрации различных жидких сред через фильтры, задерживающие микробы. К таким мелкопористым фильтрам, у которых размеры пор меньше размеров бактерий, относятся фильтры Шамберлана из каолина, пластинчатые асбестовые фильтры  Зейтца, мембранные фильтры из нитроцеллюлозы. Их используют для обработки легко портящихся от нагревания жидкостей.

Фильтры Шамберлана называют фильтровальными свечами, потому что они представляют собой высокие полые цилиндры из высококачественной мелкопористой глины – каолина. В горлышко колбы с носиком вставляют резиновую пробку с отверстием, куда устанавливают свечу. Стерилизуют аппарат в автоклаве. Место соприкосновения свечи и пробки заливают парафином. На носик колбы надевают резиновую трубку и подсоединяют к насосу.

Автор: Admin | Добавлено: 28-12-2011, 20:37 | Комментариев (0)
Агрономия » Ботаника и физиология растений » МИКРОБИОЛОГИЯ » Способы термической стерилизации:

1. Фламбирование (от лат. flamma – пламя и фр. flambé – гореть)– стерилизация путем прокаливания в пламени мелких металлических или стеклянных предметов. Таким способом стерилизуют бактериологические петли, металлические пинцеты, стеклянные шпатели и трубочки, предметные стекла и др. Температура пламени около 1000ºС. При прокаливании сгорают все микроорганизмы (вегетативные и споровые формы). Это быстрый и надежный способ стерилизации.

2. Кипячение. Является одним из самых простых способов стерилизации. Проводится в стерилизаторе – металлической прямоугольной коробке с крышкой и сеткой на дне для укладывания стерилизуемых предметов. Наливают в него воду и нагревают до кипения (нагрев электрический или на огне). Кипячение может длиться  от 15-30 мин до 2 ч при температуре около 100 ºС. Стерилизуют мелкие металлические или стеклянные предметы – шприцы, иглы, стеклянные трубки и др. При этом погибают вегетативные формы микроорганизмов и часть спор. Практикуют также ошпаривание кипятком стерилизуемого материала.

3. Стерилизация сухим жаром. Производится горячим воздухом в печи Пастера или сушильном шкафу. Печь Пастера представляет собой шкаф с двойными стенками, покрытый снаружи асбестом для теплоизоляции. Внутри шкафа устроены металлические полки с отверстиями, на которые помещают стерилизуемый материал. Нагрев электрический. Стерилизация проводится при температуре 160-180 ºС в течение 1-2 ч с момента достижения этих температур (контроли-руется по термометру). Стерилизуют сухим жаром главным образом стеклянную посуду – чашки Петри, пипетки, шпатели (обернутые в бумагу), а также пробирки, колбы.  Этот прием надежный – погибают неспоровые и споровые формы микроорганизмов. Обернутый в бумагу и простерилизованный материал можно хранить.

4. Стерилизация текучим паром. Проводится горячим влажным воздухом в аппарате Коха. Аппарат (кипятильник) Коха представляет собой металлический цилиндр, который может быть на ножках и покрыт линолеумом. В аппарат наливают столько воды, чтобы она не доходила до выступа, на который помещают металлический кружок с отверстиями и сверху на него стерилизуемый материал.

Автор: Admin | Добавлено: 28-12-2011, 20:36 | Комментариев (0)

Термическая (горячая) стерилизация основана на уничтожении микробов с помощью высоких температур. Это легко выполнить и широко используется в практической деятельности человека. При этом нужно помнить, что у вегетативных (неспоровых) клеток денатурация белков и гибель клеток начинается уже при температуре 56-60 ºС. Более термоустойчивые споры погибают в сухой атмосфере при температуре 160 ºС в течение 1-2 ч, а во влажной среде гибель происходит при температуре 112-120 ºС в течение 20-30 мин.

Автор: Admin | Добавлено: 28-12-2011, 20:35 | Комментариев (0)
Агрономия » Ботаника и физиология растений » МИКРОБИОЛОГИЯ » Приготовление ряда питательных сред

Мясопептонный бульон (МПБ) – среда искусственная, жидкая, общего назначения. Для её приготовления используют мясо – говядину, телятину, конину и др. Из мяса получают фарш, заливают его холодной водопроводной водой (на 1 кг фарша 2 л воды), настаивают при температуре 5-7 ºС 18-24 ч для выделения экстрактивных веществ. Затем мясной настой кипятят 15-30 мин, охлаждают и фильтруют через полотно. К 1 л полученного бульона добавляют 5 г NaCl и 10 г пептона. Сухой пептон представляет собой жёлтый липкий порошок – продукт неполного распада белков. Соль и пептон растворяют при нагревании, доводят щелочью рН до 7,2-7,4 (слабощелочная реакция среды благоприятна для большинства микроорганизмов). Среду разливают в колбы и стерилизуют в автоклаве. Используют для приготовления МПА и МПЖ, для накопительной культуры аммонифицирующих бактерий.

Мясопептонный агар (МПА) – среда искусственная, твёрдая, общего назначения. Представляет собой плотную студнеобразную массу. Эта питательная среда широко применяется в лабораторной практике для выращивания микроорганизмов. Для её приготовления используют сухой агар-агар (по малайски агар-агар – желе) – полисахарид с низким содержанием азотистых веществ и не представляющий питательной ценности для микроорганизмов. Агар-агар имеет вид серых листовидных пластинок. Добывается он из морских водорослей багрянок. Это отличное гелеобразующее вещество – обладает способностью набухать и растворяться при нагревании, а после застывания образовывать плотную студенистую массу. Для приготовления этой среды к 1 л  МПБ добавляют 15-20 г агар-агара. Замачивают несколько часов для набухания агара, кипятят на слабом огне до полного его растворения, после этого доводят объём жидкости до первоначального дистиллированной водой, фильтруют через марлевый фильтр, смоченный предварительно горячей водой. Среду в горячем виде разливают в стеклянные колбы и стерилизуют в автоклаве. Готовый МПА имеет точку плавления 96-100 ºС и температуру застывания около 40 ºС, т. е. при комнатной температуре он всегда представляет собой твердую питательную среду. Используют для количественного анализа микрофлоры воздуха и почвы.

Автор: Admin | Добавлено: 28-12-2011, 20:33 | Комментариев (0)
Агрономия » Ботаника и физиология растений » МИКРОБИОЛОГИЯ » Исследование микроорганизмов в живом виде
Для наблюдения за движением, питанием, размножением, действием различных веществ на микроорганизмы необходимо исследовать живые клетки. Для этого готовят нефиксированные и неокрашенные препараты двумя способами: «раздавленной» и «висячей» капли.
В живом виде исследуют плесневые грибы, которые образуют налёт (пушок) на поверхности различных субстратов, например хлеба. Плесени состоят из разветвлённых гифов, составляющих мицелий. Они достаточно крупные, чтобы их можно было рассматривать даже при малом увеличении, кроме того, плохо красятся.
Автор: Admin | Добавлено: 28-12-2011, 20:31 | Комментариев (0)
Актиномицеты, или лучистые грибы (от лат. actis – луч и myces – гриб) занимают промежуточное положение между бактериями и грибами (грибобактерии). В систематике их относят к грамположительным бактериям. Как и бактерии они прокариоты ( не имеют дифференцированного ядра), на питательных средах образуют колонии, подобные бактериальным. Как и грибы они образуют мицелий, хотя гораздо тоньше, и способны размножаться спорами. Мицелий у актиномицетов может быть двух видов: субстратный, или питательный (погружен в питательную среду и выполняет функции питания) и воздушный (находится над питательной средой, на нем формируются споры и он выполняет функцию размножения, придает колонии лучистый вид).
К высшим актиномицетам относят стрептомицеты, проактиномицеты, микромоноспоры, франки. К низшим актиномицетам относят микобактерии и микококки, у которых мицелий в зачаточном состоянии. Актиномицеты широко распространены в почве и придают ей специфический землистый запах.
Стрептомицеты имеют два вида мицелия. Субстратный просматривается в виде тонких разветвлённых нитей, воздушный образует споры.
У проактиномицетов (нокардий) воздушный мицелий отсутствует или слабо развит, а субстратный выполняет функции и питания, и размножения. Он хорошо виден в виде длинных и коротких нитей, которые на определенных стадиях расчленяются на палочковидные фрагменты, в дальнейшем переходящие в палочки, которые затем становятся в спорами, а они потом вновь образуют мицелий.
У микромоноспоры мицелий тоже только субстратный, на гифах которого образуется по одной споре, дающей затем начало новому мицелию.
Актиномицеты выращивают на питательной среде Чапека или крахмало-аммиачном агаре. Колонии актиномицетов обычно некрупные, разноцветные (розовые, жёлтые, коричневые, красные, чёрные, белые), плотные, кожистые, пушистые, тестообразные, срастающиеся с субстратом.
Автор: Admin | Добавлено: 28-12-2011, 20:30 | Комментариев (0)
Агрономия » Ботаника и физиология растений » МИКРОБИОЛОГИЯ » Окраска волютина (по методу Нейссера)
Многие микроорганизмы в определенных условиях образуют запасные вещества в виде гранулярных включений. По химической природе это чаще всего полисахариды, липиды, полифосфаты, белки, а также сера, железо. К включениям микробных клеток относятся волютин, гликоген, гранулёза, жир, сера и др. Клеточные включения выявляются при помощи специальных способов окраски.
Волютин, или метахроматические зёрна (метахроматин) – запасное вещество, состоящее из полифосфатов и веществ, близких к нуклеиновым кислотам. В них сосредоточены запасы органического фосфора. Волютин имет сродство с метиленовой синью, но при окрашивании ею приобретает фиолетово-чёрный цвет. Способность приобретать иной цвет, чем цвет окрашивающего вещества, называется метахромазией. Название «волютин» произошло от Spirillum volutans, в клетках которой он был впервые обнаружен.
Волютин в виде крупных гранул находится в вакуолях дрожжей или цитоплазме бактерий (уксуснокислых, молочнокислых, азотфиксирующих) и актиномицетов.
Автор: Admin | Добавлено: 28-12-2011, 20:30 | Комментариев (0)
Агрономия » Ботаника и физиология растений » МИКРОБИОЛОГИЯ » Окраска спор у бактерий (по методу Циля-Нильсена)
У бактерий могут образовываться споры, которые обладают высокой устойчивостью к неблагоприятным условиям внешней среды и выполняют защитную функцию. Образуют споры палочковидные бактерии. Палочка со спорой называется бациллой.
Споры покрыты плотной и многослойной оболочкой, содержат мало свободной воды, много липидов и термоустойчивых соединений. Споры кислотоустойчивы и плохо окрашиваются красителями. Для того, чтобы увеличить проницаемость споры, в краситель добавляют протравитель (карболовую кислоту) и окраску производят при нагревании. Спора красится труднее, чем вегетативная часть клетки, но и медленнее обесцвечивается в кислотах. Поэтому, если после окрашивания поместить препарат в серную кислоту на определенное время, можно добиться того, что спора останется окрашенной, а вегетативная часть клетки быстро обесцветится. Затем вегетативную клетку легко можно покрасить в контрастный по цвету краситель, чтобы спора и вегетативная часть клетки были окрашены в разные цвета, тогда расположение спор в клетках будет хорошо различимо.
Автор: Admin | Добавлено: 28-12-2011, 20:30 | Комментариев (0)